PRÁCTICA 4: "TINCIÓN E IDENTIFICACIÓN"
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INTRODUCIÓN:
El principal impedimento en la observación de
bacterias en microscopio óptico es la falta de
contraste entre la célula en observación y el medio
que la rodea, la manera más simple de facilitar el
contraste es la utilización de colorantes, revelando
la presencia de determinados constituyentes
celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas,
paredes celulares, centros de actividad
respiratoria, etc.
Algunos colorantes teñirán mejor sólo después
de que la célula haya sido tratada con otra
sustancia química, que no es un colorante por sí
mismo. Esta sustancia se denomina mordiente; un
mordiente habitual es el ácido tánico. (Ihrdiagnostica,2007)
Preparación en fresco. Este tipo de técnicas se emplean para observar la forma y la movilidad de los microorganismos. Se distinguen dos procedimientos:
- Preparación en fresco simple. Una gota de la muestra se deposita en el portaobjetos y se tapa con el cubreobjetos.
Captura1.JPG - Preparación en gota pendiente. Se coloca una gota de la muestra en el centro del cubreobjetos, que se impregna ligeramente con unas gotas de vaselina. El cubreobjetos se invierte sobre un portaobjetos situado boca arriba, de manera que la gota queda en suspensión sobre el mismo.
Captura.JPG - Tinciones. Se emplean para observar las características morfológicas de los microorganismos e identificar los mismos dentro de la misma especie. Para ello se emplean los colorantes, compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad específica por algún componente y que aumentan el contraste. Hay tres técnicas principales:
- Tinción simple. Se utiliza un único colorante. En este caso, las bacterias se tiñen completamente, lo que aumenta su contraste. Se observan la forma de la célula y el tipo de agrupación.
Captura.JPG - Tinción negativa. En este caso, se coloca una gota de nigrosina o tinta chica, se extiende sobre el porta y se deja secar. Esta técnica permite poner de manifiesto ciertas estructuras celulares como cápsulas o capas mucosas.
Captura.JPG
Tinción diferencial. Este tipo de técnicas tiñen de forma diferencial las bacterias o algunas de sus estructuras, permitiendo diferenciar tipos de bacterias. La técnica más conocida es la Tinción de Gram, que permite distinguir entre bacterias grampositivas y gramnegativas. En primer lugar, se realiza una tinción con cristal violeta, de forma que todas las células se tiñen de ese color. Seguidamente se añade lugol, un mordiente. A cotinuación se decolora la muestra con alcohol, de forma que las células ram positivas siguen de color violeta, mientras que las gramnegativas se decoloran. Finalmente se realiza la tinción de contraste con safranina, de modo que las bacterias Gram negativas adquieran un color rojo. (InoovacciónyTICs,2016)
- Tinción simple. Se utiliza un único colorante. En este caso, las bacterias se tiñen completamente, lo que aumenta su contraste. Se observan la forma de la célula y el tipo de agrupación.
La tinción de Gram, denominada así por el
bacteriólogo danés Christian Gram, quien
desarrollo esta técnica en 1844.
Sobre la base de
la tinción de gran, las bacterias se clasifican en
dos grupos: gran positivos y gran negativos.
La tinción de Gram permite conocer la
morfología celular, el tamaño, la forma y su
clasificación taxonómica (Gram positivos o Gram
negativos) de acuerdo al color que tornan las
bacterias después de la tinción, sin embargo no
permite conocer la especie o género de la bacteria
al cual pertenece.
A continuación se especifican algunas
de las fuentes de error:
Impurezas en los reactivos de
Tinción.
Concentración inadecuada de los
reactivos de tinción.
pH inadecuado.
Los colorantes pueden ser
ácidos, básicos o neutros.
(Cedeño, 2011)
¿Como la tinción de Gram
permite realizar identificación bacteriana?
La tinción de Gram ofrece la coloración de las
bacterias dependiendo sus características presentes
en la pared celular, en las cuales si es Gram
positiva estas se tiñen del primer colorante (cristal
violeta) y al utilizar el mordiente (lugol), se fija a
la pared celular, por lo cual al aplicar el
decolorante no se pierde el color como sucede en
las Gram negativas se tiñen del colorante de
contraste (fucsina), por lo cual al observar en el
microscopio se logra definir la morfología de las
bacterias, es decir el tamaña y la forma por lo cual
se logra identificar los tipos de bacterias.(López,2006).
BIBLIOGRAFIA:
- (Cedeño, 2011).Fuentes de error en la tinción de
gram. Recuperado el 13 de marzo del 2018.
http://labmicrofarmaciaulat.blogspot.com/p/tincion-de-
gram_20.html.
- (López,2006). Comportamiento de las bacterias en la tinción de Gram. Recuperado el 13 de marzo del 2018 de pagina web
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp6.pdf.
- (Ihrdiagnostica,2007).Aceite deinmersión. Recuperado el 13 de marzo del 2018 de pagina web
http://www.ihrdiagnostica.com/tecnicas/pdf/AceiteDeInmersio
- ( InoovacciónyTICs,2016) La observación de los microorganismos. Recuperado el 13 de marzo del 2018 de pagina web http://microbiologia2bachillerato.blogspot.mx/2016/10/
INTEGRANTES DEL EQUIPO:
- Yesica Vega Villagomez
- Ivan Flores
- Luz Maria Martinez Samano
- Miriam Mendoza Cabrera
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